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恒奧德儀器活性氧檢測儀操作步驟注意事項(xiàng)

基于熒光探針技術(shù)，通過檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）水平評估氧化應(yīng)激狀態(tài)。常用熒光探針為 DCFH-DA （2',7'-二氯熒光黃雙乙酸鹽），其原理如下：

檢測原理

DCFH-DA本身無熒光，可自由穿透細(xì)胞膜。進(jìn)入細(xì)胞后被酯酶水解生成 DCFH ，DCFH因無法通透細(xì)胞膜而積聚于細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)ROS可氧化無熒光的DCFH生成有熒光的 DCF （二氯熒光素），熒光強(qiáng)度與ROS水平成正比。 ?

操作步驟

?探針裝載?

短時(shí)間刺激（2小時(shí)內(nèi)）的細(xì)胞：先裝載探針再刺激；長時(shí)間刺激（6小時(shí)以上）的細(xì)胞：先刺激再裝載探針。 ?

貼壁細(xì)胞采用原位裝載（直接加入探針），懸浮細(xì)胞需收集后裝載。 ?

?熒光檢測?

使用熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀或激光共聚焦顯微鏡，在激發(fā)波長480nm和發(fā)射波長525nm下檢測DCF熒光強(qiáng)度。 ?

注意事項(xiàng)

裝載探針后需洗凈殘留未進(jìn)入細(xì)胞的探針，避免背景干擾。 ?

盡量縮短探針裝載至檢測的時(shí)間間隔，減少誤差